1、了解紫外可見分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)、性能及使用方法

     2、熟悉定性、定量測(cè)定的方法

二、實(shí)驗(yàn)原理

    紫外分光光度法（Ultraviolet Spectrophtometry），又稱紫外吸收光譜法（ Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry），它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價(jià)電子在電子能級(jí)間的躍遷，是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過(guò)測(cè)定分子對(duì)紫外光的吸收，可以對(duì)大量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物進(jìn)行定性和定量測(cè)定。

苯酚是一種劇毒物質(zhì)，可以致癌，已經(jīng)被列入有機(jī)污染物的黑名單。但在一些藥品、食品添加劑、消毒液等產(chǎn)品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超標(biāo)，就會(huì)產(chǎn)生很大的毒害作用。苯酚在紫外光區(qū)的zui大吸收波長(zhǎng)λmax=270nm。對(duì)苯酚溶液進(jìn)行掃描時(shí)，在270nm處有較強(qiáng)的吸收峰。

定性分析時(shí)，可在相同的條件下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，通過(guò)比較未知樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的光譜圖對(duì)未知樣進(jìn)行鑒定。在沒有標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)譜圖或有關(guān)的電子光譜數(shù)據(jù)表進(jìn)行比較。

定量分析是在270nm處測(cè)定不同濃度苯酚的標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再在相同的條件下測(cè)定未知樣品的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可得出未知樣中苯酚的含量。

三、儀器與試劑

1．紫外可見分光光度計(jì)

2．容量瓶（1000ml、250ml）

3．比色管（50ml）

4．吸量管（5ml、10ml）

5．苯酚（AR）

準(zhǔn)確稱取苯酚0.010g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉(zhuǎn)移到1000ml的容量瓶中，作為儲(chǔ)備液。

于5支50ml的比色管中，用吸量管分別加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。

四、zui大吸收波長(zhǎng)的選擇

在標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中任取一種，以水為參比，分別在波長(zhǎng)200~300nm之間以10為間隔測(cè)定其吸收波長(zhǎng)，在吸光度zui大值附近以間隔2為單位測(cè)定，直至找到zui大吸收波長(zhǎng)。

五、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

在已篩選的zui大波長(zhǎng)下，以水為參比分別測(cè)定上述標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，畫出C-A曲線，寫出回歸曲線方程。

六、苯酚濃度的測(cè)定

    在相同情況下，測(cè)定其吸光度。根據(jù)回歸曲線方程計(jì)算出待測(cè)苯酚濃度。

七、問題討論

1、紫外可見分光光度法的定性、定量分析的依據(jù)是什么？

2、紫外可見分光光度計(jì)的主要組成部件有哪些？

3、說(shuō)明紫外可見分光光度法的特點(diǎn)及適用范圍。