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分光光度計應(yīng)用案例分析

更新時間:2022-06-28點擊次數(shù):2205

本文通過應(yīng)用紫外可見分光光度計研究動物試驗對裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖的祛痰作用。采用小鼠酚紅祛痰法觀察裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖的祛痰作用。裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量。實驗結(jié)果證明裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖具有一定的祛痰作用。

 

關(guān)鍵詞 

分光光度計;裂褶菌;胞內(nèi)多糖;發(fā)酵;酚紅祛痰法;祛痰效果

 

裂褶菌又名白參、樹花等,隸屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、裂褶菌科、裂褶菌屬,是一種食藥兼用菌[1]。其分布廣泛,在民間被廣泛用于治療小兒盜汗、婦女白帶增多、神經(jīng)衰弱、頭昏耳鳴等癥[2]。裂褶菌多糖是指從裂褶菌子實體、菌絲體以及發(fā)酵液中提取出來的水溶性多糖,是裂褶菌中最主要的生物活性物質(zhì)之一,具有抗腫瘤、抗菌、抗輻射、提高機(jī)體免疫力等多種藥理活性。由單一組分的β-(1-3)-D葡聚糖組成,其中每3個葡萄糖分子上連有1個β-(1-6)的分支[3-5]。經(jīng)研究表明,裂褶菌發(fā)酵多糖具有很好的抗炎作用。因此,推測裂褶菌發(fā)酵多糖具有祛痰的潛在功能,本研究進(jìn)行了驗證性研究。

 

1、材料與方法

1.1試驗材料

供試菌株:裂褶菌菌種由四川省綿陽市食用菌研究所提供

試驗動物:昆明種小鼠,雌性,體重(20±2)g,6周齡,由長春高新醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供,合格證號為10-5113

儀器:電子天平(梅特勒AL104)、UV-5100型紫外可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)

試劑:陽性藥川貝枇杷糖漿,江西三九藥業(yè)有限公司,批號100305J;苯酚紅、碳酸氫鈉、氫氧化鈉為國產(chǎn)分析純

 

1.2試驗方法

1.2.1裂褶菌液體發(fā)酵培養(yǎng)

將配制好的綜合培養(yǎng)基分裝入容量為250mL的三角瓶內(nèi),每瓶裝液量為100mL,121℃、20min滅菌、冷卻至室溫備用。在超凈工作臺上,每瓶接種直徑為6mm的菌餅5~7片。接種后靜置培養(yǎng)12h后置于26℃、120r/min搖床上培養(yǎng)7d[6],然后轉(zhuǎn)入裝有400mL綜合培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中,置于26℃、120r/min搖床上培養(yǎng)7d,發(fā)酵結(jié)束后,抽濾分離菌絲體及發(fā)酵液,菌絲體60℃烘干至恒重,備用。

 

1.2.2 裂褶菌胞內(nèi)多糖的提取與純化

收集的菌絲體按液料比1∶5在室溫條件下用蒸餾水超聲提取1次,每次30min,超聲頻率70Hz,然后置于80℃的恒溫水浴鍋中浸提5次,浸提的時間分別為5、4、3、2、1h。合并水提液,加入0.5%的活性炭吸附20min,過濾脫碳,減壓濃縮,用3倍體積的95%乙醇進(jìn)行沉淀,于4℃冰箱中靜置過夜。將獲得的白色纖維狀沉淀,復(fù)溶,用3倍體積的95%乙醇再沉淀,重復(fù)3次,收集沉淀,再用無水乙醇洗滌3次,直至析出液中無還原糖反應(yīng)為止。于60℃條件下烘干,得裂褶菌胞內(nèi)多糖[7]

 

1.3模型與數(shù)據(jù)分析

1.3.1祛痰動物模型的建立

取昆明種小鼠50只,隨機(jī)分為5組,即空白對照組、陽性藥對照組(20mL/kg)、裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖高劑量(500 mg/kg)、裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖中劑量(250 mg/kg)、裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖低劑量(125 mg/kg),每組10只。各組小鼠按體重灌胃給藥(20mL/kg),每天1次,連續(xù)給藥5d,其中空白對照組給等體積生理鹽水。試驗前各組小鼠禁食16h。末次給藥后1h后,由腹腔注射5%酚紅溶液0.2mL/10g,注射后30min脫頸椎處死小鼠,仰位固定于手術(shù)板上,剪開頸正中皮膚,分離氣管周圍組織,剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管。放入盛有3mL生理鹽水的試管中,再加入5%碳酸氫鈉溶液0.1 mL,使氣管段中的酚紅*釋放,用UV-5100型紫外可見分光光度計測波長在546nm范圍內(nèi)的OD值,用酚紅繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)曲線計算酚紅含量[8-10]。

 

1.3.2統(tǒng)計學(xué)處理。

運(yùn)用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,分析組間差異,試驗結(jié)果用(x±s)表示。

 

2、結(jié)果與分析

裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響試驗結(jié)果顯示,裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖高劑量組、川貝枇杷糖漿組均能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量,與空白對照組相比較,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。表明裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖具有祛痰作用(表1)。

表1 裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖對各組小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

組別

小鼠數(shù)(只)

劑量

酚紅濃度(µg/ml)

空白對照

10

-

1.01±0.33

陽性藥對照

10

20

1.51±0.51

高劑量

10

500

1.54±0.62

中劑量

10

250

1.36±0.55

低劑量

10

125

1.11±0.52

 

 

3、結(jié)論與討論

祛痰的作用原理大多為增加呼吸道分泌,使痰液變稀,或降低痰液中的黏性成分,使痰液黏度下降,或增加呼吸道黏膜上皮細(xì)胞纖毛的運(yùn)動,使痰液易于咳出。酚紅祛痰試驗是利用酚紅部分地從呼吸道排泄的特點,在化痰藥的作用下,隨著支氣管分泌的增加,由呼吸道黏膜排出的酚紅也增多,用分光光度計測出酚紅的排泌量,從而得知藥物化痰作用的強(qiáng)弱[11]。本試驗利用酚紅作為祛痰效果指示劑,在川貝枇杷糖漿及裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖的作用下,使呼吸道黏膜排出的酚紅增加,從而證實支氣管分泌液增加。本試驗研究結(jié)果顯示,裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖高劑量組能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量,使小鼠呼吸道分泌液明顯增加,與空白對照組相比較,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。表明裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖具有祛痰作用。本試驗證明了裂褶菌發(fā)酵胞內(nèi)多糖的祛痰藥理作用,為臨床合理開發(fā)應(yīng)用裂褶菌多糖提供了藥理學(xué)依據(jù),例如祛痰糖漿。同時,為進(jìn)一步地研究裂褶菌發(fā)酵多糖提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

 

4、參考文獻(xiàn)

[1] 卯曉嵐.中國經(jīng)濟(jì)真菌[M].北京:科學(xué)出版社,1998:48

[2] 黃年來,楊慶堯,張甫安,等.中國食用菌百科[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997:119.

[3] 趙琪,袁理春,李學(xué)春.裂褶菌研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報,2004,11(1):59-63.

[4] 鄧百萬,陳文強(qiáng),李志洲.裂褶菌營養(yǎng)菌絲蛋白質(zhì)成分的分析[J].氨基酸和生物資源,2003,25(4):1-2.

[5] 冀頤之,遲文鶴,杜連祥.裂褶菌胞外多糖發(fā)酵條件的研究[J].藥物生物技術(shù),2003,10(1):17-21.

[6] 王振河,萬學(xué)東,武忠偉,等.正交設(shè)計優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J].中國野生植物資源,2007,26(4):50-56.

[7] 李雪.裂褶菌液體發(fā)酵條件及發(fā)酵產(chǎn)物的藥理活性研究[D].長春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[8] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].2版.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:428.

[9] 安然,梁茂新.白術(shù)鎮(zhèn)咳祛痰、鎮(zhèn)痛和止血潛在作用的實驗研究[J].中醫(yī)雜志,2010,51(12):1125-1127.

[10] 李顯華,宋達(dá)夫,甘雨,等.固本清肺貼膏對小鼠止咳、祛痰作用的實驗研究[J].實驗動物研究,2010,27(4):40-41.

[11] 魏東,姚斌,高興亮,等.少年紅礬杏平喘糖漿鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘作用的實驗研究[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2009,19(2):29-32.

 

文章內(nèi)容來源于:劉偉峰,于浩然,王琦.裂褶菌液體發(fā)酵胞內(nèi)多糖祛痰作用的試驗研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2011,9.

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